Tato diplomová práce se zaměřuje na analýzu několika aminokyselin aktivního centra cytokininoxidasy / dehydrogenasy 1 (CKO1) z kukuřice seté (Zea mays). CKO je flavoenzym, který katalyzuje degradaci rostlinných hormonů cytokininů na adenin / adenosin a odpovídající aldehyd. Teoretická část se zabývá metabolismem a degradací cytokininů. Větší část je zaměřena na CKO, její strukturu, složení aktivního místa a vazebné interakce známých substrátů a inhibitorů. ZmCKO1 a několik dalších mutantů zahrnujících H105A, E381A a E381S bylo získáno heterologní expresí v kvasince Yarrowia lipolytica a následně izolovány vícekrokovou purifikací. Byla stanovena pH optima a substrátová specifičnost mutantů. Kinetické konstanty substrátů byly stanoveny dvěma metodami pouţívajícími 2,6-dichlorofenolindofenolu (DCPIP) a fenazinmethosulfátu (PMS) s MTT jako elektronových akceptorů. S pouţitím aminofenolové metody byly také analyzovány rychlosti reakce těchto mutantů s různými elektronovými akceptory. Výsledky ukázaly, že na rozdíl od ZmCKO1, aktivita výše zmíněných mutantů dosahuje vysokých hodnot také v přítomnosti 1,4-naftochinonu nebo koenzymu Q0. Kovalentní vazba FAD kofaktoru zprostředkovaná histidinem 105 je velmi důleţitá, ale ne nezbytně nutná pro zachování aktivity enzymu.This thesis is focused on analysis of several amino acids in the active site of cytokinin oxidase / dehydrogenase 1 (CKO1) from maize (Zea mays). CKO is a flavoenzyme, which catalyzes the degradation of plant hormones cytokinins to adenine / adenosine and the corresponding aldehyde. The theoretical part deals with the metabolism and degradation of cytokinins. Larger portion is focused on the CKO, its structure, composition of the active site and binding interactions with known substrates and inhibitors. ZmCKO1 and several other mutants including H105A, E381A and E381S were obtained by a heterologous expression in yeast Yarrowia lipolytica and subsequently isolated by multi-step purification. Optimal pH and substrate specificity of the mutants were determined. Kinetic constants of substrates were determined by two methods using 2,6-dichlorphenolindophenol (DCPIP) and phenazine methosulfate (PMS) with MTT as electron acceptors. Reaction rates of the mutants with various electron acceptors were analyzed using an aminophenol method. Results showed that unlike ZmCKO1 the activity of the above mutants reached high values also in the presence of 1,4-naphthoquinone or coenzyme Q0. Covalent binding of FAD cofactor mediated via histidine 105 is important but not essential for preserving activity of the enzyme.