Počet záznamů: 1
Izolace sulfitoxidasy a inhibice hrachové aminoxidasy
Údaje o názvu Izolace sulfitoxidasy a inhibice hrachové aminoxidasy [rukopis] / Pavlína Halamková Další variantní názvy Izolace sulfitoxidasy a inhibice hrachové aminoxidasy Osobní jméno Halamková, Pavlína (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Isolation of sulfite oxidase and inhibition of pea amine oxidase Vyd.údaje 2011 Poznámka Ved. práce Marek Šebela Dal.odpovědnost Pečová, Michaela (oponent) Šebela, Marek, 1971- (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova Sulfitoxidasa * siřičitany * kuřecí játra * purifikace proteinu * aminoxidasa * putrescin * inhibitory * hrách setý * Sulfite oxidase * sulfite * chicken liver * protein purification * amine oxidase * putrescine * inhibitors * pea Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 82266-136963195.pdf 24 1 MB 27.04.2011 Posudek Typ posudku 82266-ved-491888560.pdf Posudek vedoucího 82266-opon-189567866.doc Posudek oponenta
Tato diplomová práce je zaměřena na izolaci a charakterizaci sulfitoxidasy (EC 1.8.3.1). Uvedený enzym hraje důležitou roli v metabolismu síry v organismech, fyziologicky nezbytné přeměně siřičitanů na sírany. SUOD patří do rodiny enzymů obsahujících molybdopterinový kofaktor. Enzym se vyskytuje u rostlin, živočichů i bakterií. Výchozím materiálem pro izolaci sulfitoxidasy v této práci byla zvolena zmrazená kuřecí játra. Izolace enzymu zahrnovala tvorbu acetonového prášku a jeho extrakci, precipitaci síranem amonným, denaturaci zahříváním a dialýzu. Následovala purifikace pomocí iontově výměnné chromatografie (Macro-Prep High Q, Resource Q) a gelové permeační chromatografie (Superdex 200 HR). Identifikace sulfitoxidasy spolu s ostatními proteiny z SDS-PAGE gelu proběhla za pomoci MALDI-TOF peptidového mapování. U získaného enzymu byla stanovena hodnota Michaelisovy konstanty, pH optima a teplotní stability. Další část práce je věnována enzymu, který se podílí na oxidativní degradaci polyaminů, aminoxidase. Jsou známy dvě základní třídy aminoxidas: chinoproteinové diaminoxidasy, které mají v aktivním místě měď a flavovoproteinové polyaminoxidasy. Enzym byl identifikován u mnoha organismů, kde je zodpovědný za podstatné fyziologické procesy. Experimentální část je zaměřena na testování inhibičních účinků vybraných sloučenin na aminoxidasu. Enzym byl pro tyto účely izolován ze zmrazených etiolovaných semenáčků hrachu setého. Kroky izolace byly následující: homogenizace, dvojstupňová precipitace síranem amonným, denaturace zahříváním a dialýza. Chromatografická purifikace probíhala na kolonách s DEAE-celulosou, hydroxyapatitem a sephacrylem S 300. Na získaném enzymu byly vyzkoušeny inhibiční účinky derivátů oximů, pyridinpropanaly a purinové aldehydy. Výsledky měření ukázaly, že všechny uvedené sloučeniny mají pouze slabé inhibiční účinky nekompetitivního charakteru na aminoxidasu.This diploma thesis is focused on isolation and characterization of sulfite oxidase (EC 1.8.3.1). Mentioned enzyme plays the main role in sulfur metabolism in organisms, physiologically necessary to convert sulphite to sulphate. SUOD belongs to a family of enzymes containing molybdopterin cofactor. The enzyme occurs in plants, animals and bacteria. The starting material for sulfite oxidase isolation in this study were selected frozen chicken livers. Isolation of an enzyme involved the creation of acetone powder and extraction, ammonium sulfate precipitation, heat denaturation and dialysis. The purification using ion exchange chromatography (Macro-Prep High Q, Resource Q) and gel permeation chromatography (Superdex 200 HR) followed. Sulfite oxidase with other proteins from SDSPAGE gel were idnetified by MALDI-TOF peptide mapping. The value of Michaelis constant, pH optimum and temperature stability was determined by enzyme obtained. Next chapter is devoted to an enzyme involved in oxidative degradation of polyamines, amine oxidase. There are two basic classes of known amine oxidases: quinoprotein diamine oxidases, having copper in the active site and flavovoprotein polyamine oxidases. The enzyme was identified in many organisms, in which is responsible for important physiological processes. The experimental part is focused on the test of inhibitory effects of selected compounds on amine oxidase. The enzyme was isolated for this purposes from etiolated frozen pea seedlings. Isolation steps were as follows: homogenization, two-step ammonium sulfate precipitation, denaturation by heating and dialysis. Chromatographic purification proceeded on columns with DEAE-cellulose, hydroxyapatite and sephacryle S 300. The enzyme obtained was tested in the inhibitory effects of derivates of oximes, pyridine propanales and purine aldehydes. The measurement results showed that these compounds have only weak inhibitory effects, with uncompetitive effect on amine oxidase.
Počet záznamů: 1