Tato práce se zabývá in vitro mikropropagací rostliny Cannabis sativa L., izolací a kultivací mezofylových protoplastů. Nejvhodnějším materiálem pro protoplastizaci byly 1-2týdenní listy in vitro pěstovaných semenáčků kultivaru 'USO 31'. Bylo zjištěno, že mírně modifikované médium, které je běžně používané pro A. thaliana, je vhodné i pro iniciační fázi kultivace konopných protoplastů. Jedná se celkově o druhý záznam úspěšného založení a regenerace protoplastových kultur konopí. Transkriptomická analýza vybraných markerů ukázala, že kultivované protoplasty zůstaly životaschopné, znovu vstoupily do buněčného cyklu a aktivně reagovaly na oxidační stres, přičemž vykazovaly nižší zatížení abiotickým stresem nežli donorový materiál.This thesis focuses on the micropropagation of Cannabis sativa L. and the isolation and cultivation of mesophyll protoplasts. The optimal material for protoplast isolation was 1-2-week-old leaves of in vitro grown seedlings of the cultivar 'USO 31'. It was discovered that a slightly modified medium commonly used for A. thaliana is also suitable for the initiation phase of cannabis protoplast cultivation. This represents the second record of successful establishment and regeneration of cannabis protoplast cultures overall. Transcriptomic analysis of selected markers indicated that cultivated protoplasts remained viable, re-entered the cell cycle, and actively responded to oxidative stress while exhibiting a lower abiotic stress burden than donor material.