Počet záznamů: 1
Nadměrná exprese proteinu SAMK fúzovaného s fluorescenčním proteinem a lokalizační studie
Údaje o názvu Nadměrná exprese proteinu SAMK fúzovaného s fluorescenčním proteinem a lokalizační studie [rukopis] / Jiří Sojka Další variantní názvy Nadměrná exprese proteinu SAMK fúzovaného s fluorescenčním proteinem a lokalizační studie Osobní jméno Sojka, Jiří, (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Overexpression of SAMK protein in fusion with fluorescence protein and localization study Vyd.údaje 2020 Fyz.popis 118 Poznámka Ved. práce Ivan Luptovčiak Oponent Michaela Hradilová Dal.odpovědnost Luptovčiak, Ivan (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Hradilová, Michaela, (oponent) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Centrum regionu Haná (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova MAP kinasa * SAMK * Crispr/Cas9 * mikroskopie * MAP kinase * SAMK * Crispr/Cas9 * microscopy Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biotechnologie a genové inženýrství kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00254389-271243387.pdf 0 3.3 MB 31.12.2999 Posudek Typ posudku 00254389-ved-275522588.pdf Posudek vedoucího 00254389-opon-904098063.pdf Posudek oponenta Průběh obhajoby datum zadání datum odevzdání datum obhajoby přidělená hodnocení typ hodnocení 00254389-prubeh-840299406.docx 25.09.2018 09.06.2020 08.07.2020 1 Hodnocení známkou
Rostliny jsou neustále vystavovány nepříznivým stimulům z vnějšího prostředí, které negativně ovlivňují jejich růst a vývoj. Jako určitá obrana proti těmto stresovým faktorům jim slouží MAP kinasová kaskáda. V této diplomové práci byly připraveny pomocí molekulárně biologických technik konstrukty SAMK ve fúzi s fluorescenčním proteinem a transformovány do Nicotiana benthamiana pro zjištění lokalizace za použití mikroskopie. Dále vytvořeny konstrukty Crispr/Cas9 SAMK gRNA a otestovány v Medicago sativa. Byly úspěšně vytvořené konstrukty 35S::SAMK:mRFP a 35S::mRFP:SAMK. Lokalizace SAMK-mRFP a mRFP-SAMK v buňkách listu N. benthamiana je v jádru nikoliv v jadérku a při cytoplasmatické membráně. Za pomocí metody Western blot byla ověřena produkce SAMK-mRFP a mRFP-SAMK v listech N. benthamiana. Rostliny M. sativa transformované konstrukty SAMK gRNA byly ověřeny pomocí PCR se specifickými primery a na transgen pozitivní byly dále analyzovány za použití Western blot. V M. sativa SAMK gRNA však docházelo napříč očekávání ke zvýšené tvorbě SAMK i dalších MAP kinas. Proto lze očekávat, že byl transgen pravděpodobně umlčen.Plants are constantly exposed to adverse stimuli from the external environment, which negatively affect their growth and development. The MAP kinase cascade serves as a defense against these stressors. In this diploma thesis, constructs SAMK in fusion with a fluorescent protein were prepared using molecular biological techniques and transformed into Nicotiana benthamiana to determine the location using microscopy. Furthermore, the creation of Crispr/Cas9 SAMK gRNA constructs and their testing in Medicago sativa were performed. The 35S::SAMK:mRFP and 35S::mRFP:SAMK constructs were successfully generated. The localization of SAMK-mRFP and mRFP-SAMK in N. benthamiana leaf cells is in the nucleus and not in the nucleolus and also near to the cytoplasmic membrane. The production of SAMK-mRFP and mRFP-SAMK in N. benthamiana leaves was verified by Western blotting. Plants M. sativa transformed SAMK gRNA constructs were verified by PCR with specific primers and further transgene positive plants analyzed using Western blot. However, in M. sativa SAMK gRNA, the production of SAMK and other MAP kinases increased. Therefore, it can be expected that the transgene was probably silenced.
Počet záznamů: 1