Úvod: Primární myelofibróza (PMF) je chronickým klonálním onemocněním krvetvorby. Spolu s pravou polycytémií (PV) a esenciální trombocytémií (ET) patří do skupiny Ph-negativních myeloproliferativních neoplázií (Ph-MPN), které mohou ve svém průběhu také přecházet do stádia myelofibrózy (MF). V naší analýze jsme hodnotili vybrané rizikové faktory u myelofibrózy. Pro lepší přehlednost byla naše práce rozdělena do tří částí (podstudií). Podstudie 1: Hodnocení mutačního profilu u pacientů s myelofibrózou. Riziková stratifikace pacientů je důležitá pro správné terapeutické rozhodnutí a pomáhá nám selektovat vysoce rizikové nemocné vhodné k allo-SCT. Hodnotili jsme výskyt a vliv driver mutací a přídatných sekvenčních variant vybraných genů na průběh onemocnění. Sekvenováním nové generace byl vyšetřen výskyt přídatných sekvenčních variant 14 kandidátních genů v době diagnózy. Prokázali jsme, že typ driver mutace a přítomnost přídatných sekvenčních variant genů ovlivňují klinický fenotyp a průběh nemoci. Podstudie 2: Vyšetření poruch hemostatické rovnováhy u nemocných s myelofibrózou. Jelikož trombózy patří k nejzávažnějším komplikacím nepříznivě ovlivňujícím kvalitu i délku života nemocných, posuzovali jsme eventuální dysbalanci hemostázy měřením individuálního potenciálu pro generaci trombinu. Hlavním cílem bylo stanovení generace trombinu s využitím komplexní metody trombin generačního testu, který monitoruje koncentraci trombinu v čase a je schopen reflektovat všechny pro- a antikoagulační reakce. Nálezy TGT svědčí pro rozdílnou generaci trombinu u nemocných s MF, tvorba trombinu byla ovlivněna zejména počtem trombocytů, dále pak mutačním stavem či pokročilostí choroby. Podstudie 3: Stanovení kostního obratu a metabolismu u pacientů s myelofibrózou. Hlubší poznání patogeneze fibrózy kostní dřeně by mohlo nejen zpřesnit klasifikaci Ph-MPN, ale také zlepšit monitorování nemocných. Hodnotili jsme biochemické markery kostní remodelace (ALP, P1NP, ICTP), kostní metabolismus a produkci osteoprotegerinu. Testované plasmatické markery nebyly dostatečně citlivé pro neinvazivní monitorování fibrózy kostní dřeně. Potvrzená zvýšená exprese osteoprotegerinu zřejmě hraje roli v patogenezi myelofibrózy. Z parametrů kostního metabolismu byly zaznamenány rozdíly jen v sérových koncentracích vitaminu D, tíže jeho deficitu korelovala s pokročilostí choroby.Introduction: Primary myelofibrosis (PMF) is classified among chronic Philadelphia chromosome-negative myeloproliferative neoplasms (Ph-MPNs), together with essential thrombocythemia (ET) and polycythemia vera (PV); these may progress to myelofibrosis (MF). In our analysis, we have evaluated selected risk factors in MF. Our work was divided into three parts. Part 1: The evaluation of mutation profile in patients with myelofibrosis. Careful risk stratification of patients with MF is of great importance to adequate therapeutic decision-making. The study analyzed the mutational profile of patients with MF. This is a study of the effect of driver mutations and additional sequence variants in genes on the clinical course in patients with MF. Next generation sequencing was used to assess the presence of additional sequence variants in 14 candidate genes at diagnosis. The study proves that the driver mutation types and the presence of additional gene variants define variations in the clinical manifestations and course of the disease. Part 2: Thrombin generation testing in patients with myelofibrosis. Thrombotic events are serious complications negatively influencing the quality and length of these patients' lives. The present study was undertaken to evaluate the benefit of thrombin generation test and its potential use in predicting the risk of thrombosis in MF patients. In MF patients, thrombin generation was mainly influenced by platelet counts and, to a lesser extent, by mutation status, activity and progression of the disease. Part 3: Assessing bone turnover and metabolism in patients with myelofibrosis. The study assessed biochemical markers of bone remodeling and osteoprotegerin (OPG) to find a suitable marker for noninvasive monitoring of bone marrow fibrosis, as well as bone metabolism. The tested plasma parameters are not sensitive enough for monitoring of bone marrow fibrosis. Increased expression of OPG is likely to play a role in the pathogenesis of MF. Serum concentrations of vitamin D are lower in MF, the severity of its deficiency is correlated with disease stage.