Počet záznamů: 1
Purifikace glutamylendopeptidasy II z filtrátu kultury Streptomyces griseus
Údaje o názvu Purifikace glutamylendopeptidasy II z filtrátu kultury Streptomyces griseus [rukopis] / Anita Vašíčková Další variantní názvy Purifikace glutamylendopeptidasy II z filtrátu kultury Streptomyces griseus Osobní jméno Vašíčková, Anita (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Purification of glutamyl endopeptidase II from culture filtrate of Streptomyces griseus Vyd.údaje 2019 Poznámka Ved. práce Marek Šebela Oponent Zbyněk Zdráhal Dal.odpovědnost Šebela, Marek, 1971- (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Zdráhal, Zbyněk, (oponent) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova Streptomyces griseus * glutamylendopeptidasa II * pronasa * kapalinová chromatografie * hmotností spektrometrie * Streptomyces griseus * glutamyl endopeptidase II * pronase * liquid chromatography * mass spectrometry Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00227639-836932430.zip 14 17.3 MB 02.05.2019 Posudek Typ posudku 00227639-ved-300465208.pdf Posudek vedoucího 00227639-opon-382244133.pdf Posudek oponenta
Proteolytické enzymy představují přibližně 2% celkových proteinů přítomných u každého typu organismu. Štěpí proteiny, nebo polypeptidové řetězce tak, že katalyzují exergonní hydrolýzu peptidové vazby. Využívají se pro proteomickou analýzu, při které je rozštěpení proteinu na menší fragmenty důležitým krokem. Zásadní skutečností je, aby vybraný enzym štěpil specificky u konkrétního aminokyselinového zbytku případně dvou-tří zbytků za vzniku dostatečně velkých fragmentů analyzovatelných hmotnostní spektrometrií. Cílem této práce bylo purifikovat co nejčistější glutamylendopeptidasu II z filtrátu kultury Streptomyces griseus (pronasy). Tento enzym přednostně štěpí peptidovou vazbu u karboxylu kyseliny glutamové, případně kyseliny asparagové. Nejdříve byla potvrzena přítomnost tohoto enzymu v pronase se současnou identifikací dalších proteinů obsažených ve filtrátu. V dalším experimentu se postupovalo podle protokolu Svendsen et al. (1991). Kombinací chromatografických materiálů s podobnými vlastnostmi materiálů použitých v článku se podařilo purifikovat zatím necharakterizovanou proteasu (UniProtKB - B1VQD5_STRGG), u které byly charakterizovány její vlastnosti hydrolýzy peptidové vazby. V dalších experimentech byly zvoleny různé kombinace chromatografických materiálů, kterými bylo získáno několik enzymových směsí obsahujících glutamylendopeptidasu II. Proteiny byly identifikovány pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie na přístroji MALDI TOF/TOF. Nejčistější směs obsahovala glutamylendopeptidasu II a streptogrisin A.Proteolytic enzymes represent approximately 2% of total proteins present in each type of organism. These proteases catalyze exergonic hydrolysis of the peptide bond and they are used in proteomic analysis to obtain specific peptide fragments. It is essential to cleave specifically at a particular amino acid residue or two-three other residues to produce optimal fragments that can be analyzed by mass spectrometry. The aim of this work was to purify the purest glutamyl endopeptidase II mixture from the filtrate of Streptomyces griseus (pronase). This enzyme is characterized by preference for glutamic acid, optionally aspartic acid. First, the presence of this enzyme in pronase was confirmed together with identification of other proteins contained in the filtrate. In second experiment, the protocol Svendsen et al.(1991) was followed. Due to combination of chromatographic materials with similar properties as used in the paper, we managed to purify a non-characterized protease (UniProtKB - B1VQD5_STRGG). Afterwards, specific cleavage preferences of this proteas were characterized. In further experiments, other combinations of chromatographic materials were applied to obtain several enzyme mixtures containing glutamyl endopeptidase II. Proteins were identified using MALDI TOF/TOF tandem mass spectrometry. The purest mixture contained glutamyl endopeptidase II and streptogrisin A.
Počet záznamů: 1