Předložená práce se zabývá chirální separací antifungálního léčiva cis-itrakonazolu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie s důrazem na možnosti semipreparativní purifikace všech stereoizomerů. Teoretická část se věnuje problematice antifungálních léčiv azolového typu, separacím na chirálních polysacharidových fázích a separaci itrakonazolu. Náplní experimentální části práce je nalezení optimálních podmínek pro separaci čtyř stereoizomerů cis-itrakonazolu v mobilních fázích tvořených směsí čistých rozpouštědel bez přídavku aditiv. Cis-itrakonazol je možno v semipreparativním módu separovat ve dvou krocích použitím tris (3,5-dimethylfenylkarbamátu) celulózy a tris (4-methylbenzoátu) celulózy jako stacionárních fází.Presented thesis deals with chiral separation of an antifungal drug - itraconazole - using high performance liquid chromatography with emphasis on possibilities of semipreparative purification of particular stereoisomers. Theoretical part discusses azole antifungal drugs, separations using chiral polysaccharide stationary phases and separations of itraconazole. Experimental part is devoted to finding the optimal conditions for separation of four cis-itraconazole stereoisomers using mobile phases comprising only pure solvents with no additives. Itraconazole can be separated in semipreparative mode in two steps using cellulose tris (3,5-dimethylphenylcarbamate) and cellulose tris (4-methylbenzoate) stationary phases.