Počet záznamů: 1
Purifikace a charakterizace tRNA isopentenyltransferasy z kukuřice
Údaje o názvu Purifikace a charakterizace tRNA isopentenyltransferasy z kukuřice [rukopis] / Ester Lasotová Další variantní názvy Purifikace a charakterizace tRNA isopentenyltransferasy z kukuřice Osobní jméno Lasotová, Ester (autor diplomové práce nebo disertace) Překl.náz Purification and characterization of the maize tRNA isopentenyl transferase Vyd.údaje 2015 Fyz.popis 73 s. + CD ROM Poznámka Oponent Petr Galuszka Ved. práce Jitka Frébortová Dal.odpovědnost Galuszka, Petr (oponent) Frébortová, Jitka (vedoucí diplomové práce nebo disertace) Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra biochemie (udelovatel akademické hodnosti) Klíč.slova tRNA isopentenyltransferasa * ZmIPT10 * DMAPP * syntetický oligonukleotid tRNA s konsensuální sekvencí 17 nukleotidů * tRNA isopentenyl transferase * ZmIPT10 * DMAPP * synthetic 17-base tRNA oligonucleotide Forma, žánr diplomové práce master's theses MDT (043)378.2 Země vyd. Česko Jazyk dok. čeština Druh dok. PUBLIKAČNÍ ČINNOST Titul Mgr. Studijní program Navazující Studijní program Biochemie Studijní obor Biochemie kniha
Kvalifikační práce Staženo Velikost datum zpřístupnění 00186810-261172139.pdf 17 1.9 MB 30.04.2015 Posudek Typ posudku 00186810-ved-284986337.pdf Posudek vedoucího 00186810-opon-277736879.doc Posudek oponenta Průběh obhajoby datum zadání datum odevzdání datum obhajoby přidělená hodnocení typ hodnocení 00186810-prubeh-453208971.docx 01.09.2011 30.04.2015 25.05.2015 1 Hodnocení známkou Signatura Čár.kód Lokace Dislokace Info DP-KBC/235 (PřF-KBO) 3134517947 PřF-Holice PřF, Knihovna Holice - sklad pouze prezenčně
Enzym tRNA isopentenyltransferasa katalyzuje přenos isopentenylové skupiny z dimethylallyldifosfátu (DMAPP) na adenin specifické tRNA v pozici 37. Cílem diplomové práce bylo purifikovat a charakterizovat enzym tRNA-IPT z kukuřice, který je označován jako ZmIPT10. Fúzní protein byl exprimován z rekombinantního plasmidu pTYB12::ZmIPT10 v Escherichia coli. Izolovaný protein byl postupně purifikován na třech různých chromatografických kolonách. Aktivita enzymu byla stanovena pomocí metody HPLC spojené s UV a hmotnostním detektorem. Pro enzym ZmIPT10 bylo určeno pH optimum (pH 8,5). Bylo prokázáno, že enzym katalyzuje přenos DMAPP na syntetický oligonukleotid tRNA s konsensuální sekvencí 17 nukleotidů, který obsahoval všechny důležité konzervované strukturní prvky. Pro substrát DMAPP byla stanovena Michaelisova konstanta 124 moll-1. Pro syntetický substrát tRNA o sekvencí 17 nukleotidů se Michaelisovu konstantu nepodařilo určit. Aktivita enzymu nebyla prokázána pro hydroxymethylbutenyldifosfát a mutanty syntetického tRNA oligonukleotidu A36G, A37G a A38G. Další studie by se měly podrobněji zaměřit na charakterizaci enzymu ZmIPT10 vzhledem k substrátové specifitě a určení Michaelisových konstant pro substráty.tRNA isopentenyl transferase catalyzes transfer of the isopentenyl moiety from dimethylallyl diphosphate (DMAPP) to adenine at position 37 of certain tRNAs. The aim of this work was to purify and characterize the tRNA-IPT from maize (Zea mays) that is named as ZmIPT10. The fusion protein was expressed from a recombinant plasmid pTYB12::ZmIPT10 in Escherichia coli. The isolated protein was purified on three different chromatographic columns. The enzyme activity was determined using HPLC method with UV and mass detection. The pH optimum of ZmIPT10 was determined to be pH 8,5. The enzyme catalyzes transfer of DMAPP to a synthetic 17-base tRNA oligoribonucleotide in which all known conserved structural features were present. Michaelis constant for DMAPP is 124 moll-1. Michaelis constant for synthetic 17-base tRNA oligoribonucleotide could not be determined. The enzyme activity was not confirmed for hydroxymethylbutenyl diphosphate and three mutant forms of 17-base tRNA oligoribonucleotide A36G, A37G and A38G. Further studies will focus on detailed ZmIPT10 characterization with respect to substrate specificity and determination of Michaelis constants for specific substrates.
Počet záznamů: 1