Tato práce se zabývá vývojem metodiky pro stanovení kyseliny 2,4?dichlorofenoxyoctové (2,4?D) a jejích potencionálních metabolitů v rostlinném materiálu. Teoretická část se věnuje rešerši na téma auxinů využívaných v zemědělství jako herbicidy, především pak na mechanismus účinku 2,4?D. Dále se věnuje principům jednotlivých analytických metod, které byly k izolaci a stanovení 2,4?D a jejích metabolitů využity. V experimentální části byla vyvinuta nová metoda využívající rychlou chromatografii s hmotnostní detekcí, které předcházela izolace daných látek z rostlinného materiálu pomocí extrakce tuhou fází a imunoafinitní chromatografie. Metoda byla využita k identifikaci a kvantifikaci 2,4?D a jejích metabolitů z ošetřeného kalusu. Zjistili jsme, že se v materiálu nachází v kvantifikovatelné míře pouze konjugáty 2,4?D s kyselinami glutamovou a asparagovou.We have developed the method for quantification of 2,4?dichlorophenoxyacetic acid and its potential metabolites in plant matrices. The theoretical part consists of knowledge summaries about auxins-based herbicides, especially about the status of mechanism and the mode of action of 2,4?D as well as the principles of analytical methods used for isolation and quantification of 2,4?D metabolites. In the experimental part, the optimizing method based on a fast liquid chromatography with mass spectrometric detection was developed including SPE and IAC purification of the compounds from complex plant matrices. This method was used for identification and quantification of these compounds in the treated tobacco BY-2 callus. We found two conjugates of 2,4?D with glutamic and aspartic acids in the treated matrices which we were able to quantify.