Počet záznamů: 1  

Molekulární determinace interakce rostlina/Potyvirus

  1. Údaje o názvuMolekulární determinace interakce rostlina/Potyvirus [rukopis] / Jana Rohožková
    Další variantní názvyMolekulární determinace interakce rostlina/Potyvirus
    Osobní jméno Rohožková, Jana (autor diplomové práce nebo disertace)
    Překl.názMolecular determination of interaction plant/Potyvirus
    Vyd.údaje2011
    Fyz.popis82
    PoznámkaVed. práce Milan Navrátil
    Ved. práce Milan Navrátil
    Dal.odpovědnost Navrátil, Milan (vedoucí diplomové práce nebo disertace)
    Navrátil, Milan (školitel)
    Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Katedra botaniky (udelovatel akademické hodnosti)
    Klíč.slova Potyvirus * PSbMV * P1 peptidáza * VPg * P3-6K1 * Potyvirus * PSbMV * P1 peptidase * VPg * P3-6K1
    Forma, žánr disertace dissertations
    MDT (043.3)
    Země vyd.Česko
    Jazyk dok.čeština
    Druh dok.PUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitulPh.D.
    Studijní programDoktorský
    Studijní programBiologie
    Studijní oborBotanika
    Kvalifikační práceDownloadedSizedatum zpřístupnění
    00171551-419676732.pdf133.6 MB01.12.2011
    PosudekTyp posudku
    00171551-ved-605063791.docPosudek vedoucího
    00171551-opon-462379422.pdfPosudek oponenta
    Call numberBarcodeLocationSublocationInfo
    DIS/101 (PřF-KBO)3134513674PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladIn-Library Use Only

    Pea seed-borne mosaic virus (PSbMV; Virus mozaiky hrachu prenosný semenom) patrí do rodu Potyvirus, je prenosný semenom a spôsobuje vážne straty na úrode strukovín.Genóm tohto vírusu kóduje 3 peptidázy: P1, HC-Pro a NIa. Jedine P1 peptidáza (lokalizovaná na N terminálnom konci polyproteinu) však ostáva bez jasnej funkcie v priebehu vírusovej infekcie. Exprimovali sme skrátenú oblasť P1 (?33-143), ktorou sme následne imunizovali králika a vyrobili si tak vlastnú polyklonálnu protilátku proti tomuto peptidu. Imunoprecipitáciou z úplného lyzátu pripraveného z infikovanej rastliny hrachu sme zistili, že P1 (42 kDa) sa môže vyskytovať v priebehu infekcie v skrátenej forme (30 kDa). Pravdepodobný interakčný partner je vírusový CI. Ďalej sme P1 lokalizovali v protoplastoch infikovanej rastliny hrachu imunofluorescenčne a to v cytoplazme a v jadre. Popísali sme motív Cys2His2 zinkového prstu (C2H2 ZnF), ktorý je čiastočne podobný tomu vyskytujúcemu sa u eukryotov, kde bol popísaný. Následne sme navrhli model tohto ZnF v in silico podmienkach. Pokúsili sme sa nájsť homológiu tohto motívu i u iných Potyvírusov, čo sa nám podarilo, a to u ďalších 6 vírusov (4 Potyvírusov, 2 Tritimovírusov). Izoláty PSbMV sa rozdeľujú do 4 patotypov (P1, P2, P3 a P4). Takéto rozdelenie bolo rozhodnuté na základe priebehu vírusovej infekcie na rastlinách hrachu nesúcich gény rezistencie sbm-1 a sbm-2. Vírusová proteín VPg bol nájdený ako gén virulencie odpovedajúci rastlinnému génu smb-1. Vírusový determinant virulencie interagujúci s sbm-2 bol nájdený v oblasti P3-6K1. Cieľom našej práce bolo zaradiť izoláty PSbMV nájdené v Českej Republike do jednotlivých patotypov a to pomocou sekvenovania oblastí VPg a P3- 6K1. Sekvenčná analýza poukázala na distribúciu izolátov do troch patotypov. Ďalej sme postupovali v overení tohto výsledku pomocou biologický testov.Pea seed-borne mosaic virus (PSbMV) a member of the genus Potyvirus, can be transmitted by seeds and causes serious lost in the legume crop yields. Its genome is consisted of 3 peptidases ? P1, HC-Pro and NIa. Interestingly only P1 peptidase localized on the N terminal part of the viral polyprotein still remains without any concrete function influencing viral infection. We have expressed truncated part of P1 (?33-143) for immunizing of rabbit to produce polyclonal antibody against P1. Using this antibody we have found, that P1 (42 kDa) can act in the truncated form (30 kDa) during viral infection. Its interacting partner is CI. Immunohistochemical localization of P1 in the protoplasts obtained from infected pea plant demonstrated localization of P1 in the cytoplasm as well as in the nucleus. We have described C2H2 zinc finger motif (ZnF), which is non-standard of that presented in the eukaryotic world. We demonstrate in silico predicted protein models of found ZnF. After identification of this ZnF we found P1 of other 6 viruses (4 Potyvirus, 2 Tritimovirus) which are containing it too. Predicted protein models are confirming canonical secondary structure of found ZnF. PSbMV isolates are differed into 4 pathotypes (P1, P2, P3 and P4). This differentiation was done due to the path of viral infection on the pea plants carrying genes of resistance sbm-1 and sbm-2. Viral protein VPg was considered as matching gene of virulence. Viral determinant of virulence corresponding to the interaction with sbm-2 was mapped as P3-6K1 protein of PSbMV. We analyzed sequences of coding regions for VPg and P3- 6K1 Czech isolates of PSbMV to class found isolates to the pathotype group. Interestingly, we found that isolates are distributed into all three pathotypes with a slight difference in the sequence of PSB204CZ isolate. We have designed novel primers bordering coding region of interest. To confirm the results coming from the molecular experiments we made biological testing.

Počet záznamů: 1  

  Tyto stránky využívají soubory cookies, které usnadňují jejich prohlížení. Další informace o tom jak používáme cookies.