Schopnost xantindehydrogenasy (XDH) hydroxylovat in vitro některé cytokininy (CK) na purinovém jádře v polohách 8 a 2 je známa již dlouho, doposud však nebyl ověřen jejich přirozený výskyt u rostlin. Tato diplomová práce shrnuje poznatky o strukturní rozmanitosti, metabolismu, přenosu signálu, fyziologických funkcích a metodách analýzy CK. Dále se zabývá popisem XDH, její funkcí v rostlinných buňkách a možnostmi stanovení její enzymové aktivity. V experimentální části je kladen důraz na vývoj metody kvalitativní a kvantitativní analýzy hydroxyderivátů CK z rostlinných tkáních. Pro purifikaci je použita extrakce na pevné fázi, nejlepších výsledků bylo dosaženo se sorbentem Oasis? MCX. Koncová analýza je postavena na ultra-účinné kapalinové chromatografii (UHPLC) s detekcí tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS). Podařilo se dosáhnout dostatečného rozlišení kritických párů tvořených cis a trans isomery 8-hydroxy a 2,8-dihydroxyzeatinu, limity detekce byly v rozmezí 20-360 fmol. Aktivita XDH byla monitorována u huseníčku rolního, ječmene setého a hrachu setého v několika vývojových stádiích (mladé, dospělé a senescentní rostliny) a rostlinných orgánech (kořen, stonek, list). Na základě získaných dat a dostupné literatury byly vybrány vhodné vzorky pro UHPLC-MS/MS analýzu hydroxyderivátů CK. Pouze v jediném vzorku (senescentní listy hrachu) byl detekován signál retenčním časem odpovídající 8-hydroxy-trans-zeatinu, jeho identita však nemohla být potvrzena.Xanthine dehydrogenase (XDH) is known for its ability to oxidize several cytokinins (CK) at positions 8 and 2 on purine skelet to their respective hydroxy derivates, however those substances have not been found in plants to date. Contemporary knowledge about CK structural diversity, metabolism, signaling, physiological functions and analytical methods for their determination are summarized in this master thesis. Description of XDH, its functions in plant cells and options for measurement of its activity is also included. The experimental part focuses on development of qualitative and quantitative analytical methods for hydroxy derivates of CK. Solid phase extraction is used for purification, the best results were obtained with Oasis? MCX sorbent. The final step of CK analysis was accomplished by ultra high performance liquid chromatography (UHPLC) with tandem mass spectrometry (MS/MS). Baseline separation of cis and trans isomers of 8-hydroxy and 2,8-dihydroxyzeatin was achieved as well as detection limits within 20-360 fmol range. XDH activity was monitored in different stages of development (young, adult and senescent plants) and organs (roots, stems and leaves) of Arabidopsis thaliana, Hordeum vulgare and Pisum sativum. Based on the obtained data and available publications suitable samples for UHPLC-MS/MS analysis were selected. Only one relevant signal was detected in the sample from senescent leaves of pea. Its retention time corresponds with 8-hydroxy-trans-zeatin, but its identity could not be confirmed.