Počet záznamů: 1  

Exprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae

  1. Údaje o názvuExprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae [rukopis] / Veronika Kolomazníková
    Další variantní názvyExprese lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+ - ATPasy v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae
    Osobní jméno Kolomazníková, Veronika (autor diplomové práce nebo disertace)
    Překl.názExpression of human alpha-3 beta-1 complex of the Na+/K+ - ATPase in yeast Saccharomyces cerevisiae
    Vyd.údaje2017
    Fyz.popis65
    PoznámkaVed. práce Jaroslava Šeflová
    Oponent Miroslav Huličiak
    Dal.odpovědnost Šeflová, Jaroslava (vedoucí diplomové práce nebo disertace)
    Huličiak, Miroslav (oponent)
    Dal.odpovědnost Univerzita Palackého. Centrum regionu Haná (udelovatel akademické hodnosti)
    Klíč.slova Sodno-draselná pumpa * exprese * kvasinky * neurologické poruchy * Sodium-potasium pump * expression * yeast * neurologi-cal disorders
    Forma, žánr bakalářské práce bachelor's theses
    MDT (043)378.22
    Země vyd.Česko
    Jazyk dok.čeština
    Druh dok.PUBLIKAČNÍ ČINNOST
    TitulBc.
    Studijní programBakalářský
    Studijní programBiochemie
    Studijní oborBiotechnologie a genové inženýrství
    Kvalifikační práceStaženoVelikostdatum zpřístupnění
    00221649-567466706.pdf542 MB03.05.2017
    PosudekTyp posudku
    00221649-ved-372446255.pdfPosudek vedoucího
    00221649-opon-292895916.pdfPosudek oponenta
    SignaturaČár.kódLokaceDislokaceInfo
    BP-KBC/205 (PřF-KBO)3134520310PřF-HolicePřF, Knihovna Holice - skladpouze prezenčně

    Cílem této bakalářské práce byla příprava lidského komplexu alfa-3 beta-1 Na+/K+-ATPasy v kvasinkách Sa-charomyces cerevisie. Na+/K+-ATPasa byla úspěšně připraven jako fúzní protein s histidinovou kotvou na N-konci podjednotky beta. Důležitými faktory pro pří-pravu membránových proteinů je složení kultivačního média, rozrušení buněčné membrány detergenty a doba solubilizace membrán. Jako účinnější se ukázala solubilizace 2 hodiny pomocí detergentů SDS a DDM. Nicméně, využití afinitní chromatografie vedlo ke značným ztrátám podjednotky alfa. Jako vhodnější metoda se ukázala purifikace s využitím diferenciální centrifugace založená na protokolu izolace Na+/K+-ATPasy z vepřových ledvin. Při úspěšné přípravě lidského alfa-3 beta-1 komplexu Na+/K+-ATPasy v aktivním stavu je možné studovat strukturní změny způsobené mutacemi v genu ATP1A3 kódující isoformu alfa-3, jejíž mutace zapříčiňují několik neurologických poruch.We expressed the human complex alpha-3 beta-1 of Na+/K+-ATPase in yeast cells Saccharomyces cerevisiae. The recombinant protein was expressed as the His-tag fusion protein, which was localised on the N-terminus of beta subunit. A crucial step in the purification of membrane proteins is their solubilisation with detergents. We identified the suitable detergents (malto-sides and SDS) and the incubation time for membrane solubilisation. Moreover, the considerable losses of the alpha subunit occurred during the affinity chromatography. According to these findings we decided to change the purification procedure. We used the analogous protocol for the isolation of the porcine kidney Na+/K+-ATPase. The preparation of Na+/K+-ATPase in yeast can be useful for the studies of mutation effects on the enzyme structure.

Počet záznamů: 1  

  Tyto stránky využívají soubory cookies, které usnadňují jejich prohlížení. Další informace o tom jak používáme cookies.